Das Phusion® Kit für die ortsspezifische Mutagenese ist ein vielseitiges und effizientes Hilfsmittel zur Einführung von Punktmutationen, Insertionen oder Deletionen in alle Arten von Plasmid-DNA.
- Robuste und zuverlässige exponentielle Amplifikationsmethode
- Keine zusätzlichen Erfordernisse, wie z.B. spezielle Vektoren, Restriktionsstellen oder Methylierung des Zielplasmids
- Das Start-Template muss nicht in einem separaten Schritt zerstört werden
- Minimiert unerwünschte Sekundärmutationen
- Amplifikation großer Plasmide von bis zu 10 kb
- T4 DNA-Ligase ist im Kit enthalten: keine Reinigung vor oder nach der Ligation erforderlich
- Kompatibel mit allen Stämmen kompetenter E. coli-Zellen
Mit diesem Kit wird das gesamte Plasmid unter Verwendung phosphorylierter Primer amplifiziert, welche die gewünschte Änderung einführen. Das amplifizierte, lineare PCR-Produkt, das die gewünschte Mutation enthält, wird in einer 5-minütigen Ligationsreaktion mit T4 DNA-Ligase zirkularisiert. Das erhaltene Plasmid kann dann in jeden beliebigen Stamm kompetenter E. coli-Zellen transformiert werden.
Die optimale Annealing-Temperatur für Phusion DNA-Polymerasen kann sich deutlich von der von Taq-basierten Polymerasen unterscheiden. Die Hot Start-Modifikation der Polymerase verhindert die Amplifikation unspezifischer Produkte und die unerwünschte Degradierung der Primer vor dem ersten PCR-Zyklus.
Bitte beachten Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
