In einem serumfreien Zellkultursystem ist es sehr wichtig, Zellen auch in einem serumfreien Gefriermedium und nicht in einem serumhaltigen Medium kryokonservieren. Bei Verwendung eines normalen serumhaltigen Gefriermediums beeinflusst das Serum das Zellkultursystem über einen langen Zeitraum. Dieser Einfluss kann nur durch Verdünnung während einer großen Anzahl von Passagen nach der Aussaat beseitigt werden.
- Anhaftende Zellen: Anhaftende Zellen mit Trypsin/EDTA entfernen. Trypsin mit Trypsin-Inhibitor neutralisieren, Zellen durch Zentrifugieren bei geringer Beschleunigung (200×g) für 3-5 Minuten pelletieren und Trypsin-Inhibitor-Lösung entfernen. Zellen in kaltem Cryo-SFM bei einer Konzentration von 1 - 4 Millionen Zellen/ml resuspendieren. Frieren Sie die Zellen allmählich ein (1 °C/Minute) und lagern Sie sie in flüssigem Stickstoff.
- Zellen in Suspension: Zellen pelletieren, indem Sie sie 4 Minuten lang bei niedriger Beschleunigung (200×g) zentrifugieren. Entfernen Sie den Überstand und resuspendieren Sie die Zellen vorsichtig in Cryo-SFM bei einer Konzentration von 1-5 Millionen Zellen/ml. Frieren Sie die Zellen allmählich ein (1 °C/Minute) und lagern Sie sie in flüssigem Stickstoff.
- Auftauen: Schütteln Sie das Fläschchen vorsichtig in warmem Wasser (37 °C), bis etwa 90% des Gefriermediums gerade aufgetaut sind. Entfernen Sie das Fläschchen sofort und schütteln Sie weiter, bis der gesamte Inhalt aufgetaut ist. (Lassen Sie das Fläschchen nicht länger bei 37 °C inkubieren. Die Lebensfähigkeit der Zellen ist im aufgetauten Gefriermedium drastisch verringert.) Wischen Sie es mit 70% Ethanol ab und entfernen Sie die Kappe. Achten Sie dabei darauf, das Innengewinde nicht mit den Fingern zu berühren. Den Inhalt des Fläschchens vorsichtig mit einer Pipette resuspendieren und den Inhalt des Fläschchens in die ausgeglichenen Kulturgefäße geben.
Cryo-SFM von Provitro ist eine neue Formulierung zur Kryokonservierung tierischer und menschlicher Zellen, die kein Serum, sondern DMSO, Methylcellulose und andere kryoprotektive Inhaltsstoffe enthält. Nach der Kryokonservierung und dem Auftauen wird ein sehr hoher Prozentsatz lebensfähiger Zellen erhalten. In Cryo-SFM kryokonservierte Zellen zeigen auch nach dem Auftauen eine ausgezeichnete Anheftungsfähigkeit sowie Wachstumsleistung.