Das GFP-Certified™ Apoptose/Nekrose-Erkennungskit ist ein Multiplex-Test, der zwischen gesunden, früh apoptotischen, spät apoptotischen und nekrotischen Zellen unterscheidet und mit GFP und anderen grün fluoreszierenden Sonden kompatibel ist.
Der Übergang von Apoptose zu Nekrose ist ein lose definiertes Kontinuum, das die Erkennung der verschiedenen Phasen des Prozesses erfordert. Die Darstellung von Phosphatidylserin (PS) auf der extrazellulären Seite der Plasmamembran bleibt ein gemeinsames Kennzeichen der frühen Apoptose. Phospholipid-bindende Proteine wie Annexin V binden in Gegenwart von Ca2+ mit hoher Affinität an PS. Da Annexin V nicht zelldurchlässig ist, ist die Bindung von externalisiertem PS selektiv für frühe apoptotische Zellen. In ähnlicher Weise stellt der Verlust der Plasmamembranintegrität, wie er durch die Fähigkeit eines membranundurchlässigen DNA-interkalierenden Farbstoffs zur Markierung des Zellkerns gezeigt wird, einen einfachen Ansatz zum Nachweis der Apoptose und Nekrose im Spätstadium dar. In Anbetracht der Tatsache, dass Annexin V häufig an Fluorescein (auch bekannt als FITC) konjugiert ist, kann die Apoptoseerkennung in Zellen, die grünes fluoreszierendes Protein (GFP) exprimieren, problematisch sein.
Die spektrale Überlappung zwischen den Emissionsprofilen dieser beiden Fluorophore macht die Unterscheidung zwischen Signalen schwierig oder unmöglich, was die Datenqualität insgesamt beeinträchtigt. Das GFP-Certified™ Apoptose-/Nekrose-Erkennungssystem ist zwar nützlich für die Analyse von Apoptose und Nekrose in Zellen, die keine fluoreszierenden Proteine exprimieren, wurde jedoch speziell für die Verwendung mit GFP-exprimierenden Zelllinien und Zellen entwickelt, die blaue oder cyanfarbene fluoreszierende Proteine (BFPs, CFPs) exprimieren.
Darüber hinaus eignet sich das Kit für die Verwendung mit lebenden oder nachfixierten Zellen in Verbindung mit Sonden, wie markierten Antikörpern oder anderen fluoreszierenden Konjugaten, die ähnliche spektrale Eigenschaften wie Fluorescein oder Cumarin aufweisen. Dieses Kit enthält alle notwendigen Reagenzien zur Bestimmung früher und später Stadien der Apoptose sowie der Nekrose. Ein Annexin V-EnzoGold-Konjugat (verstärktes Cyanin-3) ermöglicht die Erkennung von Apoptose, die sich von Fluorescein oder GFP unterscheidet.
Das Nekrose-Erkennungsreagenz (rot), das dem rot emittierenden Farbstoff 7-AAD ähnelt, erleichtert die Erkennung von später Apoptose und Nekrose. Dieses Kit enthält auch einen Apoptose-Induktor (Staurosporin) zur Verwendung als positive Kontrolle. Erkennungsreagenzien können einzeln oder in Kombination für einzelne bzw. Multiplex-Anwendungen verwendet werden. Dieses Kit liefert auch schnelle und genaue Ergebnisse durch Durchflusszytometrie und Fluoreszenz-/Konfokalmikroskopie.
Lieferumfang: Apoptose Erkennungsreagenz 550 µl, Necrose Erkennungsreagenz (Red): 600 µl, Apoptose-Induktor (Staurosporin): 50 nmoles und Bindepuffer (10X): 6 ml.
